HCY™ Taq DNA Polymerase, Taq DNA聚合酶

HCY™ Taq DNA Polymerase, Taq DNA聚合酶

Taq DNA聚合酶

Taq DNA Polymerase简称Taq酶，是最常用的DNA聚合酶之一。

HCY™ Taq DNA聚合酶来源于Thermus aquaticus，经过基因突变与重组改造，比野生型Taq DNA聚合酶具有更高的热稳定性及扩增效率。其分子量为106 KD。HCY™ Taq DNA Polymerase具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，HCY™ Taq DNA Polymerase延伸速度最快可达5 kb/分钟，产物3’端带A碱基，可直接用TA载体克隆。

来源

HCY™ Taq DNA Polymerase为Recombinant Taq DNA Polymerases，经过基因突变与重组改造，通过大肠杆菌表达纯化获得。

用途

PCR法扩增DNA。

HCY™ Taq酶可以扩增长度达5 kb的DNA片段。通常适合扩增3kb以下的DNA片段。
使用本制品扩增得到的大部分PCR产物3’端附有一个“A” 碱基，因此可直接克隆于T-Vector中。也可以在末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端载体。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。

包装清单

保存条件

长期存放请置于-20℃避光保存。如需频繁使用，可分装后存放于4℃，避免反复冻融。解冻后应充分混匀，避免产生大量气泡。

性能介绍

HCY™ Taq  DNA Polymeras扩增片段长度

• 对0.5kb/1kb/2kb/5kb大小目的片段进行扩增,可见本产品对不同长度λDNA（0-5 kb）片段都可高效率的进行扩增。
• M表示DL10,00 DNA Marker

HCY™ Taq  DNA Polymeras扩增灵敏度

• 扩增大肠杆菌300bp片段，添加0pg/10pg/100pg /1ng/10ng/100ng浓度模板进行扩增；可见本产品可以扩增低至1ng模板量的大肠杆菌基因。
• NC表达HCY™Taq DNA Polymerase扩增无模板阴性对照。
• M表示DL500 DNA Marker

HCY™Taq DNA Polymeras扩增速度

• 延伸时间为30 sec./60 sec./120 sec.，对0.5kb/1kb/2kb/5kb大小目的片段进行扩增；
• 可见延伸时间为30 sec.和60 sec.时，分别可以良好地扩增2kb和5kb的DNA片段，说明以λ DNA为模板的PCR反应体系可以将延伸时间按照5kb/min设定。
• M表示DL10,000 DNA Marker

质量控制

1. SDS-PAGE电泳纯度大于98%；
2. 功能检测：PCR的敏感性、特异性、可重复性；
3. 无外源核酸酶活性，无外源内切、外切核酸酶污染；
4. 无表达宿主核酸残留。

注意事项：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序，不能使用本产品作为食品、化妆品或家庭用品等。未经书面许可授权或批准，不得制造、许诺销售、销售或进出口本产品，或者使用产品所有的相关专利及相关商标。

常见问题：

1. 无扩增条带

• （1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
• （2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。
• （3）变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。
• （4）反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加Taq酶以前，将反应体系95℃加热5-10分钟。
• （5）引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。
• （6）引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
• （7）DNA凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是DNA凝胶和PCR程序的问题。

2. PCR产物量过少

• （1） 退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
• （2） DNA模板量太少。增加DNA模板量。
• （3） PCR循环数不足。增加反应循环数。
• （4） 引物量不足。增加体系中引物含量。
• （5） 延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。
• （6） 变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶失活。
• （7） DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净

3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散

• （1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
• （2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
• （3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。
• （4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
• （5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
• （6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
• （7）退火温度过低。
• （8）电泳体系有问题：
  ①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；
  ②凝胶没有凝固好；
  ③琼脂糖质量差。
• （9）降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。